阿托伐他汀对急性心肌梗死后1周兔心室肌细胞L-钙离子通道电流的影响(2)
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1.2溶液与试剂
阿托伐他汀(立普妥，10mg)由辉瑞公司提供。试剂成分(mmol/L)如下：①台氏液：NaCl 136.9，NaHCO3 11.9，KCl 5.4，MgCl2 0.53， NaH2PO4 0.33，HEPES 5.0，Glucose10，用NaOH调节pH至7.3。②KB液：KOH 70，KCl 40，KH2PO4 20，L-glutamic acid 50，Tauringe 20，EGTA 0.5，HEPES 10，Glucose 10，用KOH调节pH至7.3。③ICa-L电极外液：氯化胆碱120，CsOH 4，CaCl2 1.8，MgCl2 2.0，HEPES 10，Glucose 10，用CsOH调节pH至7.3。加入4-AP(5mmol/L)、CsCl(20mmol/L)以阻断钾电流。④ICa-L电极内液:CsCl 80，MgCl2 2.0，ATPNa2 5.0，HEPES 10，EGTA 10，用CsOH调节pH至7.3。
1.3血脂测定
进行动物模型手术前，各组动物抽血进行总胆固醇测定(全自动生化分析仪)。
1.4AMI动物模型的建立
他汀组动物连续口服阿托伐他汀[5mg/(kg·d)]，心梗组和对照组同时口服安慰剂1周。动物采用2.5%硫喷妥钠1.0mL/kg耳缘静脉注射麻醉，利用针刺电极插入动物四肢皮下记录肢导心电图。沿左侧肋骨、胸骨交界处剪断肋骨，开胸后切开心包。分离并结扎冠状动脉左前降支，随之关闭缝合，即建立AMI动物模型。假手术对照组开胸后仅分离左冠状动脉前降支并穿线而不结扎，以排除开胸手术本身对心肌细胞电生理参数的影响。各组动物手术后单笼饲养1周备用。
1.5细胞分离
AMI动物模型建立1周后采用酶解的方法分离单个心室肌细胞。心梗组及他汀组细胞来源于心脏冠状动脉左前降支毗邻的左心室前壁外膜梗死区部位，特征为此梗死区外膜变为白色斑片状；对照组细胞则取自兔左心室前壁心室肌与梗死区相对应的部位。
1.6膜片钳全细胞记录
按Hamill法[2]进行，取上述制备好的心室肌细胞悬液数滴滴于灌流槽中，置于生物倒置显微镜(Olympus)下，静置5min待细胞沉底附壁后，用所测电流相应的灌流液灌流，灌流速度(2～3)mL/min，冲去死亡细胞碎片，选取表面光洁、横纹清晰的心肌细胞为研究对象。记录电极由硬质玻璃毛坯经水平拉制仪(Sutter P-97 ......
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